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医院细菌培养手指采样的方法_4篇

编辑:985健康网 发布时间:2021-02-08 09:23:09 栏目:养生知识

细菌培养的方法有哪些

根据细菌的目的和培养物的特性培养方法分为一般培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法三种。

1、一般培养法:将已接种过的培养基,置37℃培养箱内18-24小时,需氧菌和兼性厌氧菌即可于培养基上生长。少数生长缓慢的细菌,需培养3-7天直至一个月才能生长。

为使培养箱内保持一定湿度,可在其内放置一杯水。培养时间较长的培养基,接种后应将试管口塞棉塞后用石腊凡士林封固,以防培养基干裂。

2、二氧化碳培养法:某些细菌,如牛流产布氏杆菌和胎儿弧菌等需要在含有10%二氧化碳的空气中才能生长,尤其是初代分离培养要求更为严格。将已接种的培养基置于二氧化碳环境中进行培养的方法即二氧化碳培养法,

3、厌氧培养法:常用的厌氧培养方法有厌氧罐法、气袋法及厌氧箱三种。

扩展资料:

培养时应根据细菌种类和目的等选择培养方法、培养基,制定培养条件(温度、pH值、时间,对氧的需求与否等)。

一般操作步骤为先将标本接种于固体培养基上,做分离培养。再进一步对所得单个菌落进行形态、生化及血清学反应鉴定。培养基常用牛肉汤、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、血液等和某些细菌所需的特殊物质配制成液体、半固体、固体等。

一般细菌可在有氧条件下,37℃中放18~24小时生长。厌氧菌则需在无氧环境中放2~3天后生长。个别细菌如结核菌要培养1个月之久。

通过日常管理、检测、检查,了解光合细菌的生长情况,就可以结合当时环境条件的变化进行分析,找出影响光合细菌生长繁殖的原因,采取相应的措施。影响光合细菌生长的原因很多,内因是菌种是否优良,外因是光照、温度、营养、敌害和厌气程度等。

温度、光照和pH值都能影响着光合细菌的生长,而且温度、光照和pH值之间是互相制约的,温度与光照的强弱是对立统一的,所以光合细菌生长的最适条件应是互应的,即温度高,光照应弱;温度低,光照应强。

如果是温度高,光照强,pH值就会迅速升高,培养基产生沉淀,抑制光台细菌的生长;如果温度低,光照弱,光合细菌得不到最佳能源,生长速度也慢。经试验得出光合细菌生长的最适条件是:

①温度15~20℃时,光照30000~50000lx,培养基pH值为7.0;

②温度25~30℃时,光照为3000~5000lx,培养基的pH值为7.0。

参考资料来源:百度百科——细菌培养

细菌的培养方法

根据培养细菌的目的和培养物的特性培养方法分为一般培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法三种。

1. 一般培养法

将已接种过的培养基,置37℃培养箱内18-24小时,需氧菌和兼性厌氧菌即可于培养基上生长。少数生长缓慢的细菌,需培养3-7天直至一个月才能生长。为使培养箱内保持一定湿度,可在其内放置一杯水。培养时间较长的培养基,接种后应将试管口塞棉塞后用石腊凡士林封固,以防培养基干裂。

2. 二氧化碳培养法

某些细菌,如牛流产布氏杆菌和胎儿弧菌等需要在含有10%二氧化碳的空气中才能生长,尤其是初代分离培养要求更为严格。将已接种的培养基置于二氧化碳环境中进行培养的方法即二氧化碳培养法,常用方法有以下几种:

(1) 二氧化碳培养箱 可将已接种的培养基直接放入箱内孵育,即可获得二氧化碳环境。

(2) 烛缸法 将已接种的培养基,置于容量为2 000ml的磨口标本缸或干燥器内。缸盖或缸口处均需涂以凡士林,然后点燃蜡烛直立置入缸中,密封缸盖。待燃自行熄灭时,容器内约含5-10%的CO2 容器置37℃培养。

(3) 重碳酸钠-盐酸法 每升容积的容器内,重碳酸钠与盐酸按0.4g与3.5ml的比例,分别将两种药各置一器皿内(如平皿内),连同器皿置于标本缸或干燥器内,盖严后使容器倾斜,两种药品接触后即可产生二氧化碳。

3. 厌氧培养法

目前常用的厌氧培养方法有厌氧罐法、气袋法及厌氧箱三种。

(1) 厌氧罐法 是目前应用较广泛的一种方法,共分为以下几种。

抽气换气法:该法适用于一般实验室,其特点是较经济并可迅速建立厌氧环境。标本接种后,将平板放入厌氧罐,拧紧盖子,用真空泵抽出罐中空气,使压力真空表至-79.98KPa,停止抽气,充入高纯氮气使压力真空表指针回0位,连续反复3次,最后在罐内-79.98KPa的情况下,充入70%的N2 、20%H2 、10%CO2 (有人改用20%CO2 及80%H2 ,亦可获得好结果)。罐中需放入冷催化剂钯粒,可催化罐中残余的O2 和H2 化合成水。同时罐中应放有美蓝指示管,美蓝在有氧的环境下呈蓝色,无氧时为红色。临用前首先将美蓝煮沸使变成无色,放入罐中先呈浅蓝色,待罐中无氧环境形成,美蓝即可持续无色。

气体发生袋法:气体发生袋系由锡箔密封包装,其中含有两种药片,一种为含枸椽酸和重碳酸氢钠的药片,另一种是含有硼氢化钠的药片。前者遇水放出二氧化碳,后者可释放氢。使用时在袋的右上角剪一小口,灌进10ml蒸馏水,立即放入含有钯粒、指示剂及平板培养基的厌氧罐中,拧紧盖子经2-3分钟后,可感到盖子微热并有少量水蒸气出现。密封后1小时左右罐中的O2 的含量可低于<1%。

(2) 气袋法 此种方法不需要特殊设备,操作简单,使用方便,不但实验室中可用,而且外出采样、现场接种也可用。原理与气体发生袋完全相同,只是采用塑料袋代替了厌氧罐,气袋为一透明而密闭的塑料袋,内装有气体发生安瓿、指示剂安瓿、含有催化剂的带孔塑料管各一支。其操作方法为首先将接种的平板培养基放入袋中,用弹簧夹夹紧袋口,然后用手指压碎气体安瓿,20分钟后再压碎指示剂安瓿,如果指示剂不变蓝色,说明袋内达到厌氧状态,即可放入37℃进行培养。

(3) 厌氧培养箱 使用之前须仔细检查厌氧装备有无漏气等问题,以及催化剂、指示剂质量等。使用时严格遵守操作规程,保证箱内气体比例合理。

“细菌培养”的具体培养步骤是什么?

以光合细菌培养方法为例。光合细菌培养的方法,按次序分为容器、工具的消毒, 培养基的制备,接种和培养管理四个步骤。

(一)容器、工具的消毒参考、此处从略。

(二)培养基的制备

1.培养用水

如果培养的光合细菌是淡水种,菌种培养可用蒸馏水,生产培养可用消毒的自来水(或井水)配制。如果培养的光合细菌是海水种,则用天然海水配制培养基,注意在海水中加入磷元素时,不能用 磷酸氢二钾,应用 磷酸二氢钾,不然会产生大量沉淀。

2.灭菌和消毒菌种培养用的培养基应连同培养容器用高压蒸气灭菌锅灭菌。小型生产性培养可把配好的培养液用普通铝锅或大型三角烧瓶煮沸消毒。大型生产性培养则把经沉淀砂滤后的水用漂白粉(或漂白液)消毒后使用。

3. 培养基配制根据所培养种类的营养需要选择合适的培养基配方。按培养基配方把所需物质称量,逐一溶解,混合,配成培养基。也可先配成母液,使用时按比例加入一定的量即可。

(三)接种培养基配好后,应立即进行接种。光合细菌生产性培养的按种量比较高,一般为20%~50%,即菌种 母液量和新配 培养液虽之比为1∶4~1∶1,不应低于20%,尤其是微气培养,接种量更应高些,否则光合细菌在培养液中很难占绝对优势,影响培养的最终产量和质量。

(四)培养管理光合细菌的培养过程中,管理工作包括日常管理操作和测试,生长情况的观察、检查以及出现问题的分析处理等三个方面。

根据临床初步诊断及待检细菌的种类,可选用不同环境条件进行培养。常用的有需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法。为了提高检验的正确率,同一标本常同时采用两种或三种不同的培养法。

(一)需氧培养法

本法是临床细菌室最常用的培养方法,适于一般需氧和兼性厌氧菌的培养。将已接种好的平板、斜面和液体培养基等,置于35℃温箱中孵育18~24h,一般细菌可于培养基上生长,但有些难以生长的细菌需培养更长的时间才能生长。另外,有的细菌最适生长温度是28℃~30℃,如鼠疫耶尔森菌,甚至在4℃也能生长,如李斯特菌。

(二)二氧化碳培养法

有些细菌初次分离培养时须置5%~l0%C02环境才能生长良好,如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌,牛布鲁菌等。常以下列方法供给C02。

1.二氧化碳培养箱:是一台特制的培养箱,既能调节C02的含量,又能调节所需的温度。C02从钢瓶通过培养箱的C02,运送管进入培养箱内,调节好所需C02,浓度自动控制器后,将接种好的培养基直接放入培养箱中培养即可。此法适于大型实验室应用。

2.烛缸法:将已接种好的培养基置干燥器内,并放入点燃的蜡烛。干燥器盖的边缘涂上凡士林,盖上盖子,烛光经几分钟后自行熄灭,此时干燥器内C02含量约占5%~l0%,然后将干燥器放入35℃温箱内培养。培养时间一般为18~24h,少数菌种需培养3~7天或更长。

3.化学法:按每升容积加入碳酸氢钠0.49和浓盐酸0.35ml的比例,分别置于容器内。将容器连同接种好的培养基都放人干燥器内,盖紧干燥器的盖子,倾斜容器使浓盐酸与碳酸氢钠接触生成C02。

(三)厌氧培养法

适用于专性厌氧菌和兼性厌氧菌的培养。常用的厌氧培养法有:①疱肉培养基法;②焦性没食子酸法;③厌氧罐法;④气袋法;⑤厌氧手套箱法。

细菌培养一般使用什么样的方法

细菌bai分离培养的方法有哪些如果是液du体培养基,那zhi分离起来就dao比较困难,要用到专专门的冻干设备,还要属加很多柔和的保护性物质。 所以在一般的情况下最好的办法是把细菌接种到固体培养基上,这样长出来的菌落或菌苔就是你所要分离出的细菌了。原理:通过在平板上划线,将混杂的细菌在琼脂平板表面充分的分散开,使单个细菌能固定在一点上生长繁殖,形成单个菌落,以达到分离纯种的目的。若需从平板上获取纯种,则挑取一个单个菌落作纯培养。

细菌培养的方法有哪些?

细菌的方法

根据培养细菌的目的和培养物的特性培养方法分为一般培养法,二氧化碳培养法和厌氧培养法三种.

1. 一般培养法 将已接种过的培养基,置37℃培养箱内18-24小时,需氧菌和兼性厌氧菌即可于培养基上生长.少数生长缓慢的细菌,需培养3-7天直至一个月才能生长.为使培养箱内保持一定湿度,可在其内放置一杯水.培养时间较长的培养基,接种后应将试管口塞棉塞后用石腊凡士林封固,以防培养基干裂.

2. 二氧化碳培养法 某些细菌,如牛流产布氏杆菌和胎儿弧菌等需要在含有10%二氧化碳的空气中才能生长,尤其是初代分离培养要求更为严格.将已接种的培养基置于二氧化碳环境中进行培养的方法即二氧化碳培养法,常用方法有以下几种:

(1) 二氧化碳培养箱 可将已接种的培养基直接放入箱内孵育,即可获得二氧化碳环境.

(2) 烛缸法 将已接种的培养基,置于容量为2 000ml的磨口标本缸或干燥器内.缸盖或缸口处均需涂以凡士林,然后点燃蜡烛直立置入缸中,密封缸盖.待燃自行熄灭时,容器内约含5-10%的CO2 容器置37℃培养.

(3) 重碳酸钠-盐酸法 每升容积的容器内,重碳酸钠与盐酸按0.4g与3.5ml的比例,分别将两种药各置一器皿内(如平皿内),连同器皿置于标本缸或干燥器内,盖严后使容器倾斜,两种药品接触后即可产生二氧化碳.

3. 厌氧培养法 目前常用的厌氧培养方法有厌氧罐法,气袋法及厌氧箱三种.

(1) 厌氧罐法 是目前应用较广泛的一种方法,共分为以下几种.

抽气换气法:该法适用于一般实验室,其特点是较经济并可迅速建立厌氧环境.标本接种后,将平板放入厌氧罐,拧紧盖子,用真空泵抽出罐中空气,使压力真空表至-79.98KPa,停止抽气,充入高纯氮气使压力真空表指针回0位,连续反复3次,最后在罐内-79.98KPa的情况下,充入70%的N2 ,20%H2 ,10%CO2 (有人改用20%CO2 及80%H2 ,亦可获得好结果).罐中需放入冷催化剂钯粒,可催化罐中残余的O2 和H2 化合成水.同时罐中应放有美蓝指示管,美蓝在有氧的环境下呈蓝色,无氧时为红色.临用前首先将美蓝煮沸使变成无色,放入罐中先呈浅蓝色,待罐中无氧环境形成,美蓝即可持续无色.

气体发生袋法:气体发生袋系由锡箔密封包装,其中含有两种药片,一种为含枸椽酸和重碳酸氢钠的药片,另一种是含有硼氢化钠的药片.前者遇水放出二氧化碳,后者可释放氢.使用时在袋的右上角剪一小口,灌进10ml蒸馏水,立即放入含有钯粒,指示剂及平板培养基的厌氧罐中,拧紧盖子经2-3分钟后,可感到盖子微热并有少量水蒸气出现.密封后1小时左右罐中的O2 的含量可低于<1%.

(2) 气袋法 此种方法不需要特殊设备,操作简单,使用方便,不但实验室中可用,而且外出采样,现场接种也可用.原理与气体发生袋完全相同,只是采用塑料袋代替了厌氧罐,气袋为一透明而密闭的塑料袋,内装有气体发生安瓿,指示剂安瓿,含有催化剂的带孔塑料管各一支.其操作方法为首先将接种的平板培养基放入袋中,用弹簧夹夹紧袋口,然后用手指压碎气体安瓿,20分钟后再压碎指示剂安瓿,如果指示剂不变蓝色,说明袋内达到厌氧状态,即可放入37℃进行培养.

(3) 厌氧培养箱 使用之前须仔细检查厌氧装备有无漏气等问题,以及催化剂,指示剂质量等.使用时严格遵守操作规程,保证箱内气体比例合理.

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