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sp2 0细胞的养殖方法 sp2/0细胞如何培养

编辑:985健康网 发布时间:2021-02-08 08:16:49 栏目:养生知识

sp2/0细胞如何培养

培养基是否加有小牛血清,完全培养基应该含有小牛血清。传细胞时,培养液颜色由红变黄,这时应该传代。先倒掉变黄的培养液,然后用胶头滴管吸取一定量新鲜培养液滴入培养瓶中,吸取新鲜培养液多次全面吹打壁上的细胞,然后吸取吹打下的培养液传入新的(另一瓶)培养瓶中,加好培养液,然后继续培养。注意:所以步骤必须在无菌条件下操作,所有器具用前必须灭菌。

传代久了的sp2/0细胞还可以用吗

这个细胞需要营养很高,你先用含10%胎牛血清的培养基培养几次,状态好后,慢慢降低胎牛血清含量,慢慢驯化为能适应于小牛血清的培养基。现在有较多细胞碎片,建议离心下细胞。也有可能是细胞量多,营养物质跟不上。

SP2/0和 脾细胞融合后,融合细胞为什么没有抗体分泌

细胞融合是一个随机的物理过程。在小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞混合细胞悬中,经融合后细胞将以多种形式出现。如融合的脾细胞和瘤细胞、融合的脾细胞和脾细胞、融合的瘤细胞和瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。正常的脾细胞在培养基中存活仅5~7天,无需特别筛选,细胞的多聚体形式也容易死去。而未融合的瘤细胞则需进行特别的筛选去除。 细胞DNA合成一般有两条途径。主途径是由糖和氨基酸合成核苷酸,进而合成DNA,叶酸作为重要的辅酶参与这一合成过程。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下,经次黄嘌呤磷酸核糖转化酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)的催化作用合成DNA。细胞融合的选择培养基中有三种关键成分:次黄嘌呤(hypoxanthine,H)、氨甲蝶呤(aminopterin,A)和胸腺嘧啶核苷(thymidine,T),所以取三者的字头称为HAT培养基。氨甲蝶呤是叶酸的拮抗剂,可阻断瘤细胞利用正常途径合成DNA,而融合所用的瘤细胞是经毒性培养基选出的HGPRT-细胞株,所以不能在该培养基中生长。只有融合细胞具有亲代双方的遗传性能,可在HAT培养基中长期存活与繁殖。 有限稀释与抗原特异性选择: 由于细胞融合是一个随机的过程,在已经融合的细胞中,有相当比例的无关细胞的融合体,需细筛选去除。筛选过程一般分为两步进行:一是融合细胞的抗体筛选,二是在此基础上进行的特异性抗体筛选。将融合的细胞进行充分稀释,使分配到培养板的每一孔中的细胞数在0至数个细胞之间(30%的孔为0才能保证每个孔中是单个细胞),培养后取上清以ELISA法选出抗体高分泌性的细胞;这一过程常被习惯地称作克隆化。将这些阳性细胞再进行克隆化,应用特异性抗原包被的ELISA找出针对目标抗原的抗体阳性细胞株,增殖后进行冻存、体外培养或动物腹腔接种。

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